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流式細胞儀（flow cytometer）是一種能夠探測和計數(shù)以單細胞液體流形式穿過激光束的細胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細胞標志示蹤物質(zhì)為熒光標記物，因此，用來分離、鑒定細胞的流式細胞儀有被稱為熒光激活細胞分類儀，是分離和鑒定細胞群及亞群的一種強而有力的應(yīng)用工具。
| 實驗方法原理 | 流式細胞儀的使用一般分為三個步驟。，是儀器前階段，包括試劑的準備，細胞制備、細胞的熒光染色；第二，是流式細胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結(jié)果分析階段。 |
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| 實驗材料 | 淋巴細胞外周血的白細胞 |
| 試劑、試劑盒 | FACS緩沖液PBS疊氮鈉溶液儀器緩沖液FACS清潔液FACS洗凈液 |
| 儀器、耗材 | 流式細胞儀 |
| 實驗步驟 | 一、 細胞和試劑的準備
4. FACS緩沖液： 1×PBS 950 ml FCS 40 ml 10%疊氮鈉溶液 10 ml
1. 單細胞懸液的制備：將1×105~1×107的細胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘，棄上清；加入FACS緩沖液100 μl 懸浮細胞。
b.abti-CD3（2 ng/ml）檢測結(jié)果
c.abti-CD3（10 ng/ml）檢測結(jié)果
CD4及CD8細胞點狀二維圖結(jié)果
不同的熒光物要求選擇不同的激發(fā)波長，參見下表
（2）細胞的吸入：將裝有細胞的FACS測定管放置到機器吸管孔處。 先預(yù)檢測樣品，然后進行實際檢測?？筛鶕?jù)細胞的濃度選擇測定的速度（低、中或高）。所有的數(shù)據(jù)將自動存入微機。
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| 注意事項 | 1. 減少非特異熒光染色 （1）細胞的活性和狀態(tài)：流式細胞儀不但可探測細胞表面的熒光，也可探測細胞內(nèi)的熒光。因此，如果要檢測細胞表面的分子，一定要保證細胞的活性，還應(yīng)盡可能保持細胞靜止，通常在4度進行操作。否則，熒光抗體進入死細胞內(nèi)，會產(chǎn)生非特異結(jié)果。
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